Bio-rad LYNX Rapid HRP Antibody Conjugation Kit能夠使辣根過氧化物酶(HRP)快速標(biāo)記在抗體或蛋白質(zhì)上?？贵w標(biāo)記溶液中zhuan利試劑的激活能讓HRP定向共價(jià)結(jié)合在抗體上。該試劑盒可用于在接近中性的pH值的溶液環(huán)境中的抗體/蛋白質(zhì)標(biāo)記上HRP，并能保證100%抗體回收率的高結(jié)合效率。

試劑盒組分：

5 Vials of 1mg LYNX lyophilized HRP mix  

1 Vial LYNX Modifier reagent

1 Vial LYNX Quencher reagent

推薦使用以下緩沖溶液準(zhǔn)備抗體:

10-50mM amine-free buffer(例如HEPES、MES、MOPS和磷酸鹽)pH范圍6.5-8.5或者中等濃度的Tris緩沖液(< 20mM)。如果可能，避免含有nucleophilic成分的緩沖液，如amines 和 thiols(如thiomersal/thimerosal))，因?yàn)樗鼈兛赡軙?huì)與標(biāo)記試劑發(fā)生反應(yīng)。EDTA和普通的非緩沖鹽和糖對(duì)結(jié)合效率影響很小。疊氮化Na是HRP的不可逆抑制劑，避免引入疊氮化Na。理想地用于標(biāo)記的抗體的量應(yīng)該對(duì)應(yīng)于抗體與HRP之間1∶4和1∶1的摩爾比?？紤]到分子量(160,000對(duì)40,000)，這意味著對(duì)于4mg的辣根過氧化物酶，需要加入1-4mg的抗體。為獲得最佳結(jié)果，抗體體積應(yīng)達(dá)到1ml，濃度范圍為0.5-5.0mg/ml。

標(biāo)記步驟：

1. 向抗體樣品中每10μl抗體添加1μl的Modifier reagent，并輕輕混合。

2. 用移液管將混合的抗體-Modifier reagent樣品直接移至LYNX lyophilized HRP mix 中，輕輕上下吹打兩次以重懸。

3. 蓋好蓋子，然后在室溫(20-25℃)下孵育3小時(shí)，也可以孵育過夜。

4. 孵育后，每10μl抗體添加1μl的Quencher reagent。使用前靜置30分鐘。

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