小鼠ELISA試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法,用抗磷脂酰絲氨酸(PS)抗體包被于酶標板上,實驗時樣品或標準品中的磷脂酰絲氨酸(PS)會與包被抗體結合,游離的成分被洗去。
依次加入生物素化的抗磷脂酰絲氨酸(PS)抗體和過氧化物酶標記的親和素,抗體與結合在包被抗體上的磷脂酰絲氨酸(PS)結合、生物素與親和素特異性結合而形成免疫復合物,游離的成分被洗去。加入顯色底物(TMB),在過氧化物酶的催化下呈現(xiàn)藍色,加終止液后變成黃色。用酶標儀在450nm波長處測OD值,磷脂酰絲氨酸(PS)濃度與OD450值之間呈正比,通過繪制標準曲線計算出樣品中磷脂酰絲氨酸(PS)的濃度。
小鼠ELISA試劑盒檢測前準備工作:
1.請?zhí)崆?0分鐘從冰箱中取出試劑盒,平衡至室溫。
2.將濃縮洗滌液用雙蒸水稀釋(1:25)。未用完的放回4℃。從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結 晶,屬于正?,F(xiàn)象,可用40℃水浴微加熱使結晶*溶解后再配制洗滌液(加熱溫度不要超 過50℃,使用時洗滌液應為室溫)。當日使用。
使用前將所有的試劑和標本緩慢均衡至室溫(18-25oC),試劑不能直接在37度溶解,每瓶標準品加入標準品稀釋液1mL,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為10000pg/mL。準備7個稀釋標準品的EP管,每個EP管中加入150μL的標準品稀釋液,依次倍比稀釋成不同的梯度,標準品稀釋液(0pg/mL)直接作為空白孔。為保證實驗結果有效性,每次實驗請使用新的標準品溶液。
小鼠ELISA試劑盒使用注意事項:
1.保存:小鼠ELISA試劑盒中各試劑請按說明書提示合理存放。在儲存及溫育過程中避免將試劑暴露在強 光中。所有試劑瓶蓋須旋緊以防止蒸發(fā)和微生物的污染,否則可能會出現(xiàn)錯誤的結果。
2.酶標板:剛開啟的酶標板孔中可能會有少許水樣物質,此為正?,F(xiàn)象,不會對實驗結果造成 任何影響。暫時不用的板條應拆卸后放入備用鋁箔袋,按推薦溫度存放。
3.加樣:加樣或加試劑時,個孔與后一個孔的加樣時間間隔如果太大,將會導致不同的“預溫育”時間,從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。每次的加樣時間好控制在10分鐘內。